Trans Plus 細胞轉染試劑

制膠 蛋白質(zhì)生物學(xué) 試劑

• 價(jià)格￥690
• 規格1ml
• 貨號HKR063
• 單位支
• 品牌HaoKebio

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【產(chǎn)品信息】

【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】

Trans Plus 細胞轉染試劑，作為新一代的轉染試劑，其轉染原理是帶正電的聚合物與核酸分子的帶負電的磷酸基團形成帶正電的復合物后，與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用，并通過(guò)胞吞作用進(jìn)入細胞。

本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)本公司的優(yōu)化處理，具有轉染效率高，細胞毒性低，操作簡(jiǎn)單，重復性好，適用范圍廣等特點(diǎn)?

【儲存與運輸】

藍冰運輸， 4℃保存，有效期一年。（不可冰凍）

【使用方法】
使用方法（以 24 孔板為例，其他培養皿中轉染請參考表 1）

1． 接種細胞

對于貼壁細胞，轉染前 18-24 h 進(jìn)行鋪板（不含抗生素），使其在轉染時(shí)的密度大約在 80%左右。對于懸浮細胞，轉染當天，在配制 Trans-DNA 復合物之前進(jìn)行鋪板，每 500 μL 生長(cháng)培養基中加入 4~8×105cells。

【注】：培養液中的血清不影響轉染效率。轉染試劑使用量受細胞類(lèi)型及其他實(shí)驗條件影響，建議初次使用時(shí)設置梯度進(jìn)行優(yōu)化最佳使用量。

2．準備 Trans-DNA 復合物

(1) 對于每孔細胞，將 1 μg 質(zhì)粒 DNA 稀釋到 40 μL 無(wú)血清的高糖 DMEM 培養基（或OPTI-MEM I 培養基），混勻。

(2) 對于每孔細胞，將 3 μL Trans 轉染試劑稀釋到 40 μL 無(wú)血清的高糖 DMEM 培養基（或者 OPTI-MEM I 培養基），輕輕混勻。

【注】：無(wú)血清的高糖 DMEM 培養基是稀釋液，不能使用含血清的培養基進(jìn)行 DNA 和 Trans轉染試劑的稀釋。因為 Trans-DNA 轉染復合物的形成過(guò)程不能含有血清。

(3) 將稀釋好的 Trans 轉染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒 DNA 中，輕輕混勻。

【注】：此混合的順序不能反向進(jìn)行。

3．轉染細胞

(1) 將上述 80 μL Trans-DNA 轉染復合物均勻滴入到含細胞的培養皿中。輕輕晃動(dòng)培養皿或輕微振蕩，讓 Trans-DNA 復合物分散均勻。

(2) 在 37℃，5% CO2 培養箱培養 6-18 h，去除含 Trans-DNA 復合物的培養液，更換新的培養液，繼續培養至對轉入基因表達分析。

【注意事項】

1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

2. 質(zhì)粒質(zhì)量：請務(wù)必使用高純度無(wú)內毒素轉染級質(zhì)粒。通過(guò) 260 nm 光吸收測定 DNA 濃度，260nm / 280 nm 比值確定 DNA 純度（比值應該在 1.8～2.0 的范圍之內）。如有可能，請通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。

3. 細胞條件：使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保細胞沒(méi)有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉染前至少傳代兩次。建議使用李記生物的胎牛血清（貨號：AC03L055）培養細胞。

4. 細胞培養液要求： Trans 細胞轉染試劑可用于有血清培養基的轉染，并且轉染前不需要換培養基。但是，制備轉染復合物時(shí)要求用無(wú)血清培養基稀釋 DNA 和轉染試劑，因為血清會(huì )影響復合物的形成。確保細胞培養液沒(méi)有被細菌、真菌或支原體污染。轉染時(shí)培養液中不添加抗生素。

5. 試劑用量的優(yōu)化：DNA 濃度和轉染試劑使用量受細胞類(lèi)型及其他實(shí)驗條件影響，初次使用應優(yōu)化 DNA 濃度和轉染試劑量以得到最大的轉染效率。使用者可嘗試每 1 μg DNA 使用 1～4 μL 體積 Trans 細胞轉染試劑進(jìn)行優(yōu)化。DNA 和轉染試劑的比例，通常推薦是 1:2~1:5。

表 1：不同培養體積對應的待轉 RNA、 Trans、稀釋液用量

使用時(shí) DNA（μg）: Trans 細胞轉染試劑（μL）比值保持在 1:2~1:5。