• 免疫熒光(雙標)
    免疫熒光(雙標)
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    免疫熒光(雙標)

    • 價(jià)格¥85
    • 單位
    • 貨號HKF2006
    • 品牌浩克

    產(chǎn)品介紹
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    【產(chǎn)品信息】

    產(chǎn)品名稱(chēng)產(chǎn)品貨號規格價(jià)格
    免疫熒光(雙標)HKF200685元

    石蠟切片免疫熒光實(shí)驗報告

    一、實(shí)驗器材及試劑

    1. 實(shí)驗器材
    名稱(chēng)廠(chǎng)家型號
    脫水機湖北貝諾醫療科技有限公司JT-12S
    生物組織自動(dòng)包埋機湖北貝諾醫療科技有限公司JB-L5
    轉輪式切片機徠卡顯微系統上海有限公司HistoCoreBIOCUT
    石蠟包埋機(冷臺)湖北貝諾醫療科技有限公司JB-L5
    KD-P組織攤片機浙江金華科迪儀器設備有限公司51A011
    烤箱天津市萊玻特瑞儀器設備有限公司GFL125
    載玻片及蓋玻片江蘇匯達醫療器械有限公司710510    
    微波爐美的M1-L213B
    脫色搖床上海琪特分析儀器有限公司STS-3
    渦旋儀秒生科技有限公司SI-A256
    移液槍DragonKE003068
    組化筆Gene techGT1001
    熒光顯微鏡NIKONECLIPSE C1
    • 主要實(shí)驗試劑
    試劑廠(chǎng)家貨號
    無(wú)水乙醇杭州宏達化工儀器有限公司SJ003614
    二甲苯國藥集團化學(xué)試劑有限公司10023418
    20x檸檬酸抗原修復液(PH6.0)杭州浩克生物技術(shù)有限公司HKI0003
    PBS緩沖液杭州浩克生物技術(shù)有限公司 
    BSA杭州浩克生物技術(shù)有限公司HK5021
    一抗:xxxx紅+xxxx綠  
    二抗:HRP超敏山羊抗兔鼠通用二抗杭州浩克生物技術(shù)有限公司HKI0029
    Flare520杭州浩克生物技術(shù)有限公司HKI0014
    Flare570杭州浩克生物技術(shù)有限公司HKI0015
    DAPI(即用型)杭州浩克生物技術(shù)有限公司HKI0005
    抗熒光淬滅封片劑杭州浩克生物技術(shù)有限公司HKI0007-1
    • 石蠟切片免疫熒光實(shí)驗步驟
    • 石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ12min-二甲苯Ⅱ12min-無(wú)水乙醇Ⅰ6min -95%酒精6min-85%酒精6min蒸餾水洗。
    • 抗原修復:組織切片置于盛滿(mǎn)檸檬酸抗原修復液(PH6.0)的修復盒中于微波爐內進(jìn)行抗原修復,中火8min?;?min中低火7min,此過(guò)程中應防止緩沖液過(guò)度蒸發(fā),切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。
    • 阻斷內源性過(guò)氧化物酶:切片加上3%的雙氧水,室溫孵育25min,將玻片置PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。
    • 血清封閉:在組化圈內滴加3%BSA 均勻覆蓋組織,室溫封閉30min。
    • 加一抗:切片稍甩干后用組化筆在組織周?chē)?huà)圈(防止抗體流走),在圈內滴加按一定比例稀的抗體覆蓋組織。切片平放于濕盒內4°C孵育過(guò)夜。
    • 加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內滴加與一抗相應種屬的二抗覆蓋組織,避光室溫孵育50min。
    • 信號放大:將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min 。滴加相對應顏色Flare信號放大試劑,3-5min.將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min 。雙標或者多標的實(shí)驗從這一步結束后重復步驟2-7,標記第二個(gè)、或者第三個(gè)抗體,最后在進(jìn)入步驟8即可。

    8、DAPI復染細胞核:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內滴加DAPI染液,避光室溫孵育10min。

    9、封片:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。

    10、鏡檢拍照:切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察并采集圖像。

    Flare染料激發(fā)波長(cháng)發(fā)射波長(cháng)
    DAPI 藍色350420
    Flare480青綠450480
    Flare520綠490520
    Flare570紅550570
    Flare620橙590620
    Flare690粉630690

    無(wú)

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