簡(jiǎn)介：熒光定量PCR是通過(guò)熒光染料(SYBR Green)或熒光標記的特異性的探針，對PCR產(chǎn)物進(jìn)行標記跟蹤，實(shí)時(shí)在線(xiàn)監控反應過(guò)程，結合相應的軟件可以對產(chǎn)物進(jìn)行分析，計算待測樣品模板的初始濃度?？梢杂糜跈z測mRNA、lncRNA、circRNA、miRNA的基因表達水平。最終所得的PCR產(chǎn)物可以通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)一步驗證引物特異性。

　　實(shí)驗流程：

　　1.接收樣本

　　2.組織勻漿、細胞和血液樣本吹打裂解-RNA提取-RNA濃度測定—逆轉錄成cdna—熒光定量PCR-(PCR產(chǎn)物電泳)-數據分析

　　其中mRNA為普通逆轉錄，lncRNA可選采取普通和特異性逆轉錄，circRNA和miRNA采取特異性逆轉錄

　　3.交付結果：完整項目報告(擴增曲線(xiàn)、數據分析、引物信息、實(shí)驗報告)

　　實(shí)驗周期：60個(gè)循環(huán)內，7個(gè)工作日內出結果

　　樣品要求：

　　1、組織： 100mg(黃豆大小)，最少50mg(綠豆大小)，脂肪組織，結締組織，纖維化組織適當增加。

　　2、細胞：1×10^6個(gè)細胞,貼壁細胞舒展，未變圓;

　　3、全血：2mL，最少1mL新鮮血液EDTA抗凝管;

　　4、血清：2mL，干冰運輸;

　　5、植物：葉、果肉、種子等需100mg，最少50mg。

　　6、RNA樣品：純度OD260/280 比值為1.8-2.0，濃度≥500ng/ul，體積≥20ul。

　　7、cdna：cdna原液20uL。

　　樣本運輸：可選擇以下任何一種方式寄送標本

　　1.動(dòng)植物組織樣本、細胞樣本、血清、RNA、cDNA以干冰運輸;

　　2.細胞樣本也可直接寄送培養瓶(密封保證不污染、灌滿(mǎn)培養液不漏出)，常溫運輸;

　　3.全血樣本是EDTA抗凝管4度運輸。