Edu染色試劑盒（紅，AF555)

【使用方法】

動(dòng)物 EdU 注射

對于小鼠，可以按照 10-200mg/kg 的用量，把 EdU 用 PBS 配制成一定濃度，腹腔注射、特定組 織或器官局部注射或者加入飲用水中。具體用量跟所用動(dòng)物的種類(lèi)、體重和使用方式有關(guān)，可 以參考相關(guān)文獻，因此初次使用時(shí)建議對 EdU 的使用濃度進(jìn)行一定的摸索，或者直接使 50mg/kg 的濃度進(jìn)行測試。

注射方式:依據客戶(hù)實(shí)驗而定，如腹腔注射，皮下注射，肌肉注射，尾靜脈注射等，其中以腹腔 注射為多。6 小時(shí)后或根據特定實(shí)驗確定適當的時(shí)間后，快速處死小鼠，取出所需組織，按照 常規步驟制作冰凍切片或石蠟切片。EdU 標記的時(shí)候也可參考相關(guān)文獻自行調整。建議任何實(shí) 驗均可取小腸組織檢測細胞增殖情況，小腸上皮組織細胞增殖快，成年小鼠 EdU 注射 6 小時(shí)后 即可檢測到陽(yáng)性信息，可用作陽(yáng)性對照進(jìn)行預實(shí)驗。

切片處理

切片前處理：組織器官最好進(jìn)行清洗，以去除血液、組織中殘留的EdU，降低背景。

切片厚度：3-10μm 為宜，切片過(guò)厚可能會(huì )影響切片背景。

切片后處理：

石蠟切片脫蠟：二甲苯脫蠟 2 次，15 分鐘/次，乙醇梯度 (100%，95%，85%，75%) 洗脫各一次， 5 分鐘/次，去離子水洗脫 1 次。

冰凍切片處理：室溫放置 30 分鐘后，固定 10 分鐘，PBS 清洗 3 次，每次 5 分鐘。

Edu 反應

按照 PB:CU:紅色色原：AC=860:40:1:100 的比列配制 EdU 反應液。  (反應液現配現用)

每片組織滴加 50-100 μl 的 EdU 染色反應液，室溫避光孵育 15 分鐘，棄染色反應液，PBS 沖洗 3 次，每次 5 分鐘。

其他染色

客戶(hù)可以根據需要進(jìn)行細胞表面或者細胞內抗原染色。

DAPI 染色

每片組織加入 50-100ul DAPI 染色液，染色 15 分鐘，PBS 洗脫三次，每次 5 分鐘。

圖像拍照

染色完成后建議立刻觀(guān)察，使用熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡采集圖像，本試劑盒熒光染料 AF555 對應的光譜特性為 Ex/Em：557 nm/570 nm  (紅色) ；DAPI 染色液對應的光譜特性為 Ex/Em：

358 nm/461 nm (藍色) 。

【注意事項】

1. 對于體外培養細胞，具體 EdU 使用濃度、孵育時(shí)間隨樣品以及研究目的的不同，可進(jìn)行 適當調整。

2. 部分組織細胞增殖速度緩慢，為了排除造模效果不佳等因素，建議選增殖快的組織樣品作 為參照樣本 (如腸道組織)。

3. 如果背景顏色過(guò)深，可能是實(shí)驗中洗滌不充分、組織樣品固定時(shí)間過(guò)長(cháng)、固定液殘余導致。

4. 催化劑 AC 顏色發(fā)生輕微變化，點(diǎn)擊反應催化體系依舊能夠正常進(jìn)行，如呈現棕色，表明 該組分已失效，請棄用。

5. 操作時(shí)請穿實(shí)驗服，佩戴一次性手套。

4. 催化劑 AC 顏色發(fā)生輕微變化，點(diǎn)擊反應催化體系依舊能夠正常進(jìn)行，如呈現棕色，表明 該組分已失效，請棄用。

5. 操作時(shí)請穿實(shí)驗服，佩戴一次性手套。