RIPA 總蛋白裂解液

蛋白質(zhì)生物學(xué) 試劑

• 價(jià)格￥120
• 規格100ml
• 貨號HKW2011
• 單位瓶
• 品牌HaoKebio

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【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】

RIPA 裂解液（RIPA Lysis Buffer）是一種傳統的細胞及組織快速裂解液。RIPA解液裂解組織、細胞得到的蛋白樣品可以用于常規的 PAGE、 Western 等對蛋白活性沒(méi)有嚴格要求的實(shí)驗。

本產(chǎn)品主要成分包含 50 mM Tris-HCl (pH 7.4)，150 mM NaCl， 1 mM EDTA，1mM EGTA,1% NP-40、5%甘油。本產(chǎn)品適用于動(dòng)物或植物組織及細胞樣品， 也可用于真菌或細菌樣品。

【產(chǎn)品組成?】

【儲存與運輸】

冰袋（wet ice）運輸；4℃避光保存，有效期 18 個(gè)月。

【使用方法】

自備蛋白酶抑制劑。RIPA 裂解液在臨用前需加入蛋白酶抑制劑防止蛋白降解。以下使用方法中提到的 RIPA 裂解液均指已添加蛋白酶抑制劑。

組織樣品實(shí)驗：

1.組織塊用預冷 PBS洗滌，去除血污，剪成細小碎塊置于勻漿器中。

2. 加入 10 倍組織體積 RIPA 裂解液低溫勻漿。注意，RIPA 裂解液的使用量可按照約每 50 mg 組織與 1 mL 裂解液的比例添加。如組織蛋白含量較低，可降低裂解液的用量，以提高粗提溶液中的蛋白濃度。

3.將勻漿液轉移至 1.5 mL 離心管中，振蕩。冰浴 30 min，期間每 10 min 用移液器反復吹打，確保組織細胞完全裂解。

4. 12000 g離心 5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。

貼壁細胞樣品實(shí)驗：

1. 用 PBS 清洗細胞 2-3 次，最后一次徹底吸干殘留液。
2. 按照 6 孔板每孔細胞 250 μL 裂解液的比例吸取 RIPA 裂解液于細胞培養板、瓶?jì)?，反復晃?dòng)培養板或瓶，使裂解液與細胞充分接觸 3-5 min。
3. 用細胞刮刀將細胞刮下，收集到離心管中。
4. 12000 g 離心 5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。

懸浮細胞樣品實(shí)驗：

1. 離心收集細胞。
2. 按照 6 孔板每孔細胞 250 μL 裂解液的比例將細胞液與 RIPA 裂解液混合，振蕩。
3. 冰浴 30 min，期間每 10 min 用移液器反復吹打數次，確保細胞完全裂解。
4. 12000 g 離心 5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。

細菌或真菌樣本實(shí)驗：

1. 取 1 mL 菌懸液，離心去上清，PBS 洗滌一次，充分去除液體。渦旋使菌體盡量分散。
2. 加入 100-200 μL RIPA 裂解液，輕輕渦旋使菌體與裂解液充分混勻。
3. 冰浴 10 min，期間每 2 min 用移液器反復吹打數次，確保菌體完全裂解。
4. 12000 g 離心 5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。

【注意事項】

1. 組織或細胞裂解時(shí)若會(huì )出現粘稠狀?？捎靡埔浩鞣磸痛荡蚧蛘袷幤髡袷?，直至呈液狀為止。如果一直較稠，可再加入適量裂解液。
2. 本試劑不含有蛋白酶抑制劑，需自備蛋白酶抑制劑并在臨用前加入。
3. 操作時(shí)請穿實(shí)驗服，并佩戴一次性手套。