• RNA提取+逆轉錄

    RNA提取+逆轉錄

    • 價(jià)格¥60
    • 單位
    • 貨號HKF5011
    • 品牌浩克

    產(chǎn)品介紹
    產(chǎn)品參數
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    服務(wù)介紹:

    貨號名稱(chēng)規格價(jià)格
    HKF5011RNA提取+逆轉錄60

    細胞中的RNA可分為信使RNA、轉運RNA和核糖體RNA三大類(lèi),不同組織總RNA提取實(shí)質(zhì)就是將細胞裂解,釋放出RNA,并通過(guò)不同方式去除蛋白、DNA等雜質(zhì),最終獲得高純RNA產(chǎn)物的過(guò)程。再在逆轉錄酶的催化下,隨機引物、oligo(dT)或基因特異性引物的引導下合成互補的DNA (complementary DNA,cDNA)。
    實(shí)驗流程:
    取材-RNA提取-測濃度-逆轉錄成cDNA?
    其中mRNA、lncRNA、circRNA為普通逆轉錄;
    miRNA采取特異性逆轉錄(需提供基因名稱(chēng)和種屬,方便設計引物用于特異性逆轉錄 ),默認做莖環(huán)法的逆轉錄,如需做加尾法逆轉錄請特別備注說(shuō)明。

    送樣運輸要求:

    1. 樣品處理

    a) 動(dòng)物組織:常規組織100mg,脂肪組織,結締組織,纖維化組織適當增加。將組織剪切成合適大小后(建議組織塊長(cháng)寬高均不大于0.5 cm),然后迅速完全浸泡于5~10倍體積的RNAsolid?試劑中。(注意:已浸入RNAsolidTM試劑中的組織經(jīng)平衡一段時(shí)間后,可從溶液中取出,切成更小的組織塊,再重新放回RNAsolidTM試劑中;有些比較弱的液體滲透性組織如骨頭等,不適合用RNAsolidTM試劑進(jìn)行RNA保護。)

    b) 植物組織:新鮮的葉、果肉、種子最少100 mg。將嫩葉,嫩莖組織切成合適的大?。ńㄗh長(cháng)寬高均不大于0.5 cm)后,然后迅速完全浸泡于5~10倍體積的RNAsolidTM試劑中。(注意:某些植物組織天生具有的屏障,如葉子表面的蠟層可阻礙RNAsolidTM試劑的滲透,對于此類(lèi)組織,通常需破壞這些屏障層以允許溶液的浸透。)

    c) 細胞等樣本:收集不少于10^6個(gè)細胞沉淀(用PBS清洗1-2次),干冰運輸。

    d) 酵母、細菌等樣本:離心棄上清,收集一定量的菌體沉淀,干冰運輸。

    e)全血:最少1 mL新鮮血液EDTA抗凝管,干冰運輸。

    f)血清或血漿:最少1 mL,干冰運輸。

    g)RNA樣品: OD260/280為1.8-2.0,濃度≥100 ng/μL,體積≥20μL,干冰運輸。

    2. 樣品保存及運輸

    加入有RNAsolidTM試劑的樣本可在37℃保存1~2天,2天以后部分組織中的RNA會(huì )開(kāi)始降解。室溫(25℃)穩定保存1周,不會(huì )有明顯的RNA降解發(fā)生。大部分樣品置于RNAsolidTM試劑中,4℃條件下可穩定保存1個(gè)月,不會(huì )有明顯的RNA降解發(fā)生。長(cháng)期存放可先將保存在RNAsolidTM試劑中的樣本4℃浸透過(guò)夜,然后將RNAsolidTM試劑吸出棄去,再將樣本放入-20℃或-80℃長(cháng)期穩定保存3~5年。

    僅供科研用途,不可用于臨床診斷!

    無(wú)

    暫無(wú)

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