流式-JC-1

價(jià)格￥80
單位樣
貨號HKF6018
品牌浩克

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服務(wù)介紹：

貨號	名稱(chēng)	規格	價(jià)格
HKF6018	流式-JC-1	樣	80

　　一、實(shí)驗簡(jiǎn)介
　　線(xiàn)粒體膜電位的下降是細胞凋亡早期的一個(gè)標志性事件。JC-1是一種理想的用于檢測線(xiàn)粒體膜電位的熒光探針，可以檢測細胞、組織或純化的線(xiàn)粒體膜電位。其原理是，當線(xiàn)粒體膜電位較高時(shí)，JC-1聚集在線(xiàn)粒體基質(zhì)中，形成聚合物，488nm激發(fā)時(shí)的最大發(fā)射波長(cháng)為590nm，可以產(chǎn)生紅色熒光，在流式上表現為FL1和FL2雙陽(yáng)性;當線(xiàn)粒體膜電位較低時(shí)，JC-1不能聚集在線(xiàn)粒體基質(zhì)中，此時(shí)JC-1為單體，488nm激發(fā)時(shí)最大發(fā)射波長(cháng)為527nm，可以產(chǎn)生綠色熒光，形成流式圖匯總所有細胞FL1為陽(yáng)性。凋亡細胞則大多為FL1單陽(yáng)性。不同熒光顏色的轉變反應線(xiàn)粒體膜電位的變化，常用紅綠熒光的相對比例衡量線(xiàn)粒體去極化的比例。
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　　二、流式JC-1實(shí)驗步驟
　　1、收集細胞：細胞懸液轉入離心管中，1000rpm離心5min收集細胞,棄上清。
　　2、PBS洗滌細胞：加入3ml 4℃預冷的PBS完全重懸細胞，1000rpm離心5min，棄上清。沉淀震蕩混勻。
　　3、細胞計數：移取10微升在血細胞計數儀上進(jìn)行細胞計數,調整細胞為0.5-1×10^6/ml。
　　4、裝載探針：按照1:500用無(wú)血清培養基稀釋JC-1，使終濃度為10ug/mL。
　　5、孵育探針：37°C細胞培養箱內孵育20分鐘，每隔3-5分鐘顛倒混勻一下，使探針和細胞充分接觸，用無(wú)血清的培養液洗滌細胞三次，以去除未進(jìn)入細胞內的探針。
　　6、上機檢測：流式細胞儀使用激發(fā)波長(cháng)Ex=488nm，發(fā)射波長(cháng)FL1(Em=525±20nm);FL2(Em=585±20 nm)，用Flow Jo軟件分析結果。

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