細胞EdU檢測

服務(wù)介紹：

服務(wù)介紹：

EdU（5-Ethynyl-2’- deoxyuridine）是一種胸腺嘧啶核苷類(lèi)似物，能夠在細胞增殖時(shí)期代替胸腺嘧啶（T）滲入正在復制的DNA分子中，通過(guò)基于EdU與Apollo?熒光染料的特異性反應快速檢測細胞DNA復制活性，適用于細胞增殖、細胞分化、生長(cháng)與發(fā)育、DNA修復、病毒復制、細胞標記示蹤等方面。

實(shí)驗流程：

1 每孔加入100μL滲透劑(0.5% TritonX-100的PBS)脫色搖床孵育10分鐘；PBS清洗1次，5分鐘。

2每孔加入100 μL的EDU染色反應液（配置比例見(jiàn)下表），避光、室溫、脫色搖床孵育30分鐘后，棄染色反應液；

3染核：爬片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上避光晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后滴加dapi染液，或hochest染液室溫避光染核10min。

4封片：爬片用PBS（PH7.4）洗滌3次，每次5min。爬片稍甩干后將有細胞的一面朝下用抗熒光淬滅封片劑將玻片封固在載玻片上封片。

5 鏡檢拍照：切片于尼康正置熒光顯微鏡下觀(guān)察并采集圖像。（紫外激發(fā)波長(cháng)330-380nm，發(fā)射波長(cháng)420nm；FITC綠光激發(fā)波長(cháng)465-495nm，發(fā)射波長(cháng)515-555 nm；555紅光激發(fā)波長(cháng)550nm，發(fā)射波長(cháng)590nm）

結果判讀

DAPI染出來(lái)的細胞核在紫外的激發(fā)下為藍色，陽(yáng)性表達為相應熒光素標記的紅光或者綠光　

送樣運輸要求：

　　1.組織樣本放置于20倍樣本體積的固定液中固定24h以上，常溫運輸送樣。

　　2.石蠟切片常溫保存運輸

　　3.冰凍切片-20℃保存運輸

　　4.細胞爬片PFA固定15min后用無(wú)菌PBS洗滌后用無(wú)菌PBS浸泡，4℃冰袋保存運輸到實(shí)驗室。

注意事項

1.檢測之前需動(dòng)物活體注射化學(xué)試劑EdU，細胞需用化學(xué)試劑EdU處理造模，否則無(wú)陽(yáng)性。

僅供科研用途，不可用于臨床診斷！