CCK8

服務(wù)介紹：

操作步驟

1. 制作標準曲線(xiàn)（測定細胞具體數量時(shí)進(jìn)行次操作）

A) 先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量，然后接種細胞。
B) 按比例依次用培養基等比稀釋成一個(gè)細胞濃度梯度，一般要做 3-5 個(gè)細胞濃度梯度，每組 3-6 個(gè)復孔。
C) 接種后培養至細胞貼壁，然后加 CCK-8 試劑培養一定時(shí)間后測定 OD 值，制作出一條以細胞數量為橫坐標（X軸），OD 值為縱坐標（Y軸）的標準曲線(xiàn)。根據此標準曲線(xiàn)可以測定出未知樣品的細胞數量（試用此標準曲線(xiàn)的前提是實(shí)驗的條件要一致，便于確定細胞的接種數量以及加入 CCK-8 后的培養時(shí)間）。

2. 細胞活性檢測

A) 在 96孔板中接種細胞懸液（100 μL/孔）。將培養板放在培養箱中預培養（在 37℃，5% CO₂ 的條件下）。

B) 向每孔加入 10 μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì )影響 OD 值的讀數）。

C) 將培養板在培養箱內孵育 2小時(shí)。

D) 用酶標儀測定在 450 nm 處的吸光度。

E) 如果暫時(shí)不測定 OD 值，打算以后測定的話(huà)，可以向每孔中加入 10 μL 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在 24 h內吸光度不會(huì )發(fā)生變化。

3. 細胞增殖-毒性檢測

A) 在 96 孔板中配置 100 μL 的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養 24 小時(shí)（在 37 ℃，5% CO2 的條件下）。

B) 向培養板加入 10 μL 不同濃度的待測物質(zhì)。在培養箱孵育一段適當的時(shí)間（例如：6、12、24 或 48 小時(shí)）。

C) 向每孔加入 10 μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì )影響 OD 值的讀數）。如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話(huà)，可在加 CCK-8 之前更換新鮮培養基（除去培養基，并用培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養基），去掉藥物影響。

D) 將培養板在培養箱內孵育 2小時(shí)。

E) 用酶標儀測定在 450 nm 處的吸光度。

F) 如果暫時(shí)不測定 OD 值，打算以后測定的話(huà)，可以向每孔中加入 10 μL 0.1M 的 HCl 或者 1% SDS (W/V)溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在 24 小時(shí)內吸光度不會(huì )發(fā)生變化。

4. 活力計算：.

細胞活力（％）=[A(加藥)－A(空白)]／[ A(0 加藥)－A(空白)]×100

A（加藥）：具有細胞、CCK-8 溶液和藥物溶液的孔的吸光度

A（空白）：具有培養基和 CCK-8 溶液而沒(méi)有細胞的孔的吸光度

A（0 加藥）：具有細胞、CCK-8 溶液而沒(méi)有藥物溶液的孔的吸光度

細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力