免疫組化預實(shí)驗（IHC）

【產(chǎn)品信息】

免疫組化石蠟切片實(shí)驗報告

• 實(shí)驗原理

免疫組化，是應用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過(guò)化學(xué)反應使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來(lái)確定組織細胞內抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進(jìn)行定位、定性及定量的研究，稱(chēng)為免疫組織化學(xué)技術(shù)(IHC)或免疫細胞化學(xué)技術(shù)(ICC)。 

• 實(shí)驗器材及試劑

1.主要實(shí)驗器材

2.主要實(shí)驗試劑

• 實(shí)驗步驟
• 石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ12min-二甲苯Ⅱ12min -無(wú)水乙醇Ⅰ6min- 95%酒精6min- 85%酒精6min，自來(lái)水洗2min。
• 抗原修復：組織切片置于盛滿(mǎn)xxxx抗原修復緩沖液（PH ）的修復盒中于微波爐內進(jìn)行抗原修復，中火8min至沸，?；?min保溫再轉中低火7min，此過(guò)程中應防止緩沖液過(guò)度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。
• 阻斷內源性過(guò)氧化物酶：切片加上3%的雙氧水，室溫孵育25min，將玻片置PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。
• 畫(huà)圈：用組化專(zhuān)用的組化筆沿著(zhù)組織外圍輪廓畫(huà)一個(gè)與組織間隔3-4毫米的小圈，然后加入足量的PBS保證后續依次加入的封閉血清，一抗，二抗，以及顯色劑能完全覆蓋組織，而不沿著(zhù)玻片流走。
• 血清封閉:在組化圈內滴加3%BSA 均勻覆蓋組織，室溫封閉30min。
• 加一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加按一定比例配好的對應一抗，切片平放于濕盒4°過(guò)夜孵育。
• 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內滴加相對應的二抗覆蓋組織，室溫孵育50min。
• DAB顯色：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內滴加（稀釋液和濃縮液1000:50配制）新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下控制顯色時(shí)間，陽(yáng)性為棕黃色，純水沖洗切片終止顯色。
• 復染細胞核：蘇木素染色2-3min左右，自來(lái)水洗，分化液分化2秒，自來(lái)水沖洗，返藍液返藍15-30s，流水沖洗。
• 脫水封片：將切片依次放入75%酒精5min-85%酒精5min -95%酒精5min -無(wú)水乙醇5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min 中脫水透明，將切片從二甲苯拿出來(lái)稍晾干，中性樹(shù)膠封片.
• 顯微鏡鏡檢，圖像采集分析。
• 結果判讀：

蘇木素染出細胞核為藍色，DAB顯出的陽(yáng)性表達為棕黃色

• 注意事項：

1． 注意切片脫蠟是否徹底；

2． 實(shí)驗過(guò)程中切片勿干片；

3.  實(shí)驗操作中小心槍頭掛傷組織。