Dil 紅光細胞膜染色試劑盒

【產(chǎn)品信息】

產(chǎn)品名稱(chēng)	產(chǎn)品貨號	規格	有效期
Dil 紅光細胞膜染色試劑盒	HK2070	100T	一年

【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】

Dil（又稱(chēng)DilC₁₈(3)），其化學(xué)全名為1,1`-雙十八烷基-3,3,3`,3`-四甲基吲哚羰花青高氯酸鹽，是一種脂溶性、長(cháng)鏈二烷基碳菁類(lèi)熒光染料。該染料的分子量為933.87 g/mol，具有高度的脂溶性，常用于細胞膜及其他脂質(zhì)生物結構的標記。Dil進(jìn)入細胞膜后，通過(guò)橫向擴散實(shí)現雙層脂質(zhì)膜的廣泛染色，形成連續的細胞膜熒光標記，便于細胞形態(tài)和膜動(dòng)態(tài)的觀(guān)察。在脂質(zhì)環(huán)境中與細胞膜結合后，熒光強度顯著(zhù)增強，Dil在激發(fā)光照射下可發(fā)出橙紅色熒光，激發(fā)波長(cháng)為550 nm，發(fā)射最大波長(cháng)為564 nm。其性能使其成為活細胞和固定細胞膜成像的理想熒光探針。傳統檢測中，可利用標準的TRITC濾光片進(jìn)行激發(fā)和發(fā)射信號的檢測。Dil染色具有良好的細胞兼容性，不會(huì )顯著(zhù)影響細胞的存活率，因此廣泛應用于細胞追蹤、外泌體示蹤以及膜動(dòng)力學(xué)研究。由其優(yōu)異的脂質(zhì)親和性和穩定的熒光性能，使其成為細胞膜成像和示蹤研究中的重要工具。

本產(chǎn)品Dil 紅光細胞膜染色試劑盒，集成了優(yōu)化的Dil 細胞膜染色緩沖液，能夠實(shí)現快速、穩定且高效的細胞膜熒光標記，極大提升實(shí)驗的效率與熒光的亮度與穩定性。

【產(chǎn)品組成】

產(chǎn)品貨號	主要成分	產(chǎn)品規格
HK2070A	Dil 紅光細胞膜探針	40 μL
HK2070B	Dil 細胞膜染色緩沖液	10 mL

【儲存與運輸】

干冰運輸；-20℃避光保存，探針避免反復凍融，有效期 6 個(gè)月。

【使用方法】

1. Dil染色工作液配制：

1.1. 將Dil細胞膜紅色熒光探針與染色緩沖液以 1:250 比例混合稀釋?zhuān)渲瞥蒁il染色工作液（現配現用）；注意，Dil探針稀釋比可根據具體情況在 1:250-1:500 進(jìn)行調整，以獲得最佳染色效果。

2. 懸浮活細胞染色：

2.1. 收集懸浮細胞，以 500-1000 g室溫離心 3-5 min，去除細胞上清；

2.2. 使用Dil染色工作液重懸細胞，使細胞密度在 1-2×10⁶個(gè)/mL；

2.3. 置于 37℃避光孵育 5-20 min；建議根據具體細胞調整染色時(shí)間，以獲得最佳染色效果；

2.4. 孵育結束后，500-1000 g室溫離心 3-5 min，吸除Dil染色工作液；

2.5. 用 37℃預熱的PBS或細胞培養基重懸細胞，500-1000 g離心 3-5 min，去除上清；

2.6. 重復 2.5 步驟一次；

2.7. 流式細胞儀上機檢測，或將細胞轉移至多孔板、細胞培養皿或者載玻片上，在熒光顯微鏡下觀(guān)察。Dil最大激發(fā)波長(cháng) 550nm，最大發(fā)射波長(cháng) 564nm。

3. 貼壁活細胞染色（6 孔板為例）：

3.1. 將細胞提前以一定密度種植于 6 孔板中；

3.2. 吸除細胞培養基，用PBS洗滌細胞 2 次。加入 1 mL Dil染色工作液（其他規格孔板，

視情況調整，保證染料覆蓋細胞）；

3.3. 置于 37℃避光孵育 5-20 min，吸除Dil染色工作液。建議根據具體細胞調整染色時(shí)間，以獲得最佳染色效果；

3.4. 用 37℃預熱的PBS或細胞培養基，洗滌細胞 1-2 次；

加入 37℃預熱的PBS或細胞培養基，熒光顯微鏡下觀(guān)察。Dil最大激發(fā)波長(cháng) 550nm，最大發(fā)射波長(cháng)564nm。

4. 固定的貼壁細胞染色：

4.1. 樣本前處理：

對于細胞：去除細胞培養基，PBS洗滌 1-2 次。加入 4%多聚甲醛固定液，室溫固定 10 min。吸除固定液，用PBS洗滌 2-3 次；

4.2. 加入 0.1-0.5% Triton-100（PBS配制）處理細胞，室溫通透 10 min；吸除通透液，用PBS洗滌 2-3次；

4.3. （可選，免疫熒光標記）按照免疫熒光染色的方法進(jìn)行抗體的孵育或其他染料進(jìn)行染色。注意抗體孵育過(guò)程中的封閉液、抗體稀釋液、洗滌液等不能含有去垢劑；

4.4. 加入適量體積的Dil染色工作液覆蓋細胞，37℃避光孵育 5-20 min，吸除Dil染色工作液。建議根據具體細胞樣本調整染色時(shí)間，以獲得最佳染色效果；

4.5. 細胞經(jīng)PBS洗滌 2-3 次，然后置于熒光顯微鏡觀(guān)察（細胞需以適量PBS覆蓋）。Dil最大激發(fā)波長(cháng)550nm，最大發(fā)射波長(cháng) 564nm。

5. 外泌體熒光標記：

5.1. 將提取的外泌體沉淀，用適量Dil染色工作液重懸；

5.2. 將樣品置于 37℃避光孵育 30 min；

5.3. 用 10 倍體積PBS稀釋樣品體積（可選）；

5.4. 按照之前提取獲得外泌體的方案，再一次提外泌體，以去除多余的染料；

5.5. 收集的外泌體沉淀，用PBS重懸，得到Dil標記的外泌體?？捎糜谙鄳暮罄m實(shí)驗，例如細胞攝取。

【注意事項】

1. 熒光染料存在淬滅問(wèn)題，請注意避光以減緩熒光猝滅。

2. 實(shí)驗過(guò)程中請避免使用含有甘油或其它有機物的試劑，否則會(huì )影響染色效果。

3. 當需要固定操作時(shí)，樣品宜在 4%多聚甲醛中進(jìn)行固定，其他不適當的固定液會(huì )導致熒光背景高。

4. 由于細胞敏感性和實(shí)驗目的的不同，探針的稀釋比和孵育時(shí)間需根據實(shí)際情況適當調整。

5. 為了您的健康和安全，操作時(shí)請穿好實(shí)驗服、戴好手套。

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