阿利新藍-茜素紅胎鼠染色

實(shí)驗原理

該染色項目是對骨和軟骨進(jìn)行染色以觀(guān)察脊椎動(dòng)物骨骼在生理和病理狀態(tài)下的改變，阿利新藍是一種含銅離子的苯二甲藍染料，一種陽(yáng)離子染料,與硫酸根和糖蛋白結合強烈，可將黏多糖染成藍色，在骨染色中把軟骨染成藍色。茜素紅是陰離子染料能與鈣結合形成紅色沉淀，在骨骼染色中可將鈣化的骨基質(zhì)染成紅色。 ???
實(shí)驗步驟

1、樣本處死：將胎鼠浸入無(wú)水乙醇 20 分鐘，觀(guān)察至呼吸停止未見(jiàn)掙扎，取出。

2、剝皮：將標本浸入 70 攝氏度熱水中水浴加熱 25 秒，觀(guān)察至標本腫脹皮膚變白后，立即取出，浸入冷水或酒精，剝皮去內臟。

3、標本固定：把去皮后的標本整理好姿勢，（若標本脂肪過(guò)多，浸入 3% 重鉻酸鉀溶液中幾天，除去材料表面的臟物和脂肪粒塊。當溶液變渾濁時(shí)即更換 C 新液，觀(guān)察至溶液不渾濁為止，取出用清水沖洗），再浸入 95% 乙醇中繼續固定 2-3 天，觀(guān)察至標本脫水硬化。

4、軟骨染色：將標本浸泡于軟骨染色液中，觀(guān)察至肋骨、脊柱、尾骨處軟骨呈現藍色,取出,使用 70%酒精溶液反復進(jìn)行清洗，直至沖洗液顏色無(wú)色，梯度酒精復水。

5、消化加預透明:標本放入消化液中，使肌肉顏色變淺，時(shí)間控制在一小時(shí)以?xún)?，以防過(guò)度脫色軟化，放入 1%KOH 中進(jìn)行預透明，觀(guān)察至肌肉變軟透明，呈果凍狀，取出。

6、硬骨染色：將標本浸泡于硬骨染色液中，每十五分鐘觀(guān)察一次，觀(guān)察至顱骨，足趾部，脊柱處硬骨呈現深紅色，取出。

7、脫色：：將染色后的標本浸泡于 2%的 KOH 溶液中 8-12 小時(shí)，再浸泡于 1.5%的 KOH 溶液中 12-24 小時(shí)，最后浸泡于 1%的 KOH 溶液中 2-3 天，觀(guān)察至肌肉顏色變?yōu)闊o(wú)色呈果凍狀，骨組織變?yōu)榧t色，取出。

8、梯度透明：將標本依次浸泡于 1%的 KOH 溶液與丙三醇所形成的梯度溶液,配比比例分別為： 1：4、2：3、3：2、4：1，標本在梯度溶液中浸泡的時(shí)間為 1-2 天。，每次均以標本沉入梯度溶液底部為準，最后置于純甘油中進(jìn)行密封保存。

結果判讀：

標本無(wú)多余肌肉且肌肉透明無(wú)色，骨骼完整，硬軟骨染色區分明顯。

注意事項：

1． 剝離皮膚時(shí)保證骨骼完整性，尤其是腕、踝部；

2． 采用試管進(jìn)行梯度透明，更方便觀(guān)察透明程度。

3. 標本較多時(shí)防止染色液濃度變小，需定時(shí)對染色液進(jìn)行替換。